Мультиплексное ПЦР-исследование, используемое для выявления и типирования ДНК возбудителей грибковых инфекций рода Candida, Malassezia, Saccharomyces и Debaryomyces методом ПЦР Real time в пробе пациента. Формат исследования — количественный.

Заболевания человека, вызываемые различными видами патогенных и условно-патогенных грибов, являются важной проблемой здравоохранения. Данные ретроспективных исследований свидетельствуют, что подавляющее большинство летальных случаев среди микозов приходится на пациентов с иммунодефицитными состояниями различного генеза. Широкое распространение ВИЧ-инфекции, применение иммуносупрессивной терапии, проведение инвазивных диагностических процедур привело к увеличению числа пациентов с высоким риском микозов. Важнейшим условием успешного лечения микозов является ранняя и интенсивная антифунгальная терапия. В связи с чем существует потребность в совершенствовании системы ранней диагностики микозов.

Основными представителями дрожжевых грибов являются грибы родов Сandida, Saccharomyces, Debaryomyces и Malassezia. Род Сandida включает более 100 видов, из них клиническое значение имеют около 20. Патогенными для человека являются С. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. lusitaniae, C. kefyr, C. glabrata, C. guilliermondii, C. parapsilosis, C. famata и др. Из грибов, относящихся к роду Saccharomyces, инфекционную патологию вызывает вид cerevisiae. Сахаромицеты являются условно-патогенными микроорганизмами, в норме их выделяют со слизистой оболочки ротовой полости, влагалища, обнаруживают в кале, мокроте и т. д. В настоящее время известно около 14 видов грибов рода Malassezia. Грибы рода Malassezia относятся к труднокультивируемым, требовательны к условиям сохранения культуры, обладают высокой способностью к видообразованию, что значительно затрудняет их изучение и диагностику.

Для подтверждения наличия кандидозной инфекции необходима не только качественная, но и количественная оценка дрожжевых грибов, проводимая в сопоставлении с клинической симптоматикой, с учетом наличия фоновых заболеваний, микст-инфекции.

Установление этиологической роли конкретного возбудителя при микозах чаще всего является непростой задачей, обусловленной определенными ограничениями стандартных методов их диагностики. С помощью методов лабораторной диагностики, направленных на выделение чистой культуры возбудителей микозов, возможна их видовая идентификация не ранее, чем через 1-3 недели. Микроскопическое исследование биологического материала, как правило, позволяет лишь предположить природу заболевания, но не определить возбудитель до вида. В настоящее время все большее применение в лабораторной диагностике микозов находят молекулярно-биологические методы определения ДНК патогена, позволяющие определить возбудителя до вида с высокой чувствительностью и специфичностью. На практике особое распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Подозрение на кандидоз, кандидемию, кандидурию или кандидоносительство.

Мониторинг динамики колонизации дрожжевыми грибами ран, катетеров.

Обследование пациентов из групп риска.

Специальной подготовки не требуется. Перед взятием материала из уретры рекомендуется не мочиться в течение 1,5-2 часов. Недопустимо забирать материал из уретры, влагалища, цервикального канала у женщин во время месячных.

Соскоб из уретры. Перед взятием материала наружное отверстие уретры обработать тампоном смоченным стерильным физиологическим раствором. Провести массаж уретры. Далее ввести зонд в уретру (у женщин на глубину 1-1,5 см., у мужчин на глубину 3-4 см). Осторожно собрать материал вращательными движениями. Извлечь зонд и поместить его рабочую часть в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, зонд удалить, пробирку закрыть, защёлкнув замок.

Соскоб из влагалища. Погрузить рабочую часть зонда в вагинальное отделяемое заднего свода влагалища и, вращая зонд, максимально набрать материал. Извлечь зонд и поместить его рабочую часть в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, зонд удалить, пробирку закрыть, защёлкнув замок.

Соскоб из цервикального канала. Удалить слизь с поверхности шейки матки стерильным тампоном, ввести зонд на глубину 0,5-1,5 см. в цервикальный канал и осторожно сделать два полных оборота по часовой и против часовой стрелки. Извлечь зонд, избегая касания стенок влагалища и поместить его рабочую часть в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, зонд удалить, пробирку закрыть, защёлкнув замок.

Мазок из ротоглотки. Материал получают сухим стерильным ватным тампоном на палочке. После взятия материала поместить тампон в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, тампон удалить, пробирку закрыть.

Мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, плевральная жидкость. Собирается в сухой стерильный контейнер. Закрыть контейнер.

На этикетке пробирки (контейнера) указать Ф.И.О. пациента (или номер) и вид исследования. В направлении на исследование обязательно указать Ф.И.О. пациента, пол, дату рождения, номер пробирки (контейнера), вид материала и необходимые исследования. Материал должен быть доставлен в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру, материал может храниться в холодильнике при температуре + 2 - +8ºС.

Материал для исследования: оскоб из уретры, влагалища, цервикального канала, мазок из ротоглотки, мокрота, бронхоальвеолярный лаваж

Метод исследования: ПЦР Real time

Единицы измерения: Lg (копий/образец)

В данном исследовании выявляются и типируются следующие возбудители грибковых инфекций:

Meyerozyma guilliermondii (C. guilliermondii);

Candida albicans;

Pichia kudriavzevii (C. krusei);

Saccharomyces cerevisiae;

Candida auris;

Candida tropicalis;

Clavispora lusitaniae (C. lusitaniae);

Debaryomyces hansenii (C. famata);

Candida dubliniensis;

Candida glabrata;

Candida parapsilosis;

Kluyveromyces marxianus (C. kefyr);

Malassezia spp.;

Malassezia furfur.

Исследование выполняется в полуколичественном формате. Результат исследования выражается десятичным логарифмом количества копий ДНК-мишени в образце.

В тест-систему включен контроль взятия материала (КВМ). При значениях КВМ меньше 3,0 Lg (копий/образец) - недостаточное количество материала и рекомендуется повторное взятие материала для исследования.

Трактовка результатов исследования:

обнаружено (в анализируемом образце обнаружены фрагменты ДНК, специфичные для исследуемого микроорганизма); К результату добавляется комментарий с указанием уровня выявленной бактериальной ДНК в lg (копий/образец);

не обнаружено (в анализируемом образце не обнаружено фрагментов ДНК, специфичных для исследуемых микозов, или концентрация возбудителей в образце ниже границы чувствительности метода).

Дополнительно рекомендуемые исследования: E615 Антитела к Candida IgG; E617 Антитела к Candida IgG (титр); G087 МикозоСкрин (выявление и типирование возбудителей грибковых инфекцийрода Candida, Malassezia, Saccharomyces и Debaryomyces в крови), методом PСR Real Time; G251 Candida albicans, обнаружение ДНК (количественно).

Скачкова Т.С. Микозы. // Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Под ред. Акимкина В.Г., Твороговой М.Г. - Москва. ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 2020: 213-215.

Holzheimer R.G., Dralle H. Management of mycoses in surgical patients -- review of the literature. /Eur J Med Res. 2002 May 31; 7(5):200-226.

Kullberg B.J., Oude Lashof A.M.L. Epidemiology of opportunistic invasive mycoses. /Eur J Med Res. 2002 May 31; 7(5):183-191.

В клиниках партнеров BION или в процедурном кабинете