I этап. Оценка взятия биоматериала и общей бактериальной массы.

Контроль взятия материала (КВМ): для получения адекватных результатов исследования, КВМ должен быть более 104 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец) > 4,0]. Если КВМ менее 104 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец) < 4,0] – материала для исследования недостаточно, рекомендуется повторное взятие материала.

Общая бактериальная масса (ОБМ): показатель общей бактериальной обсеменённости. Нормальное значение ОБМ: 105,5 - 109 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец): 5,5-9,0]. Если ОБМ меньше 106 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец) < 6,0], общая бактериальная обсеменённость влагалища низкая. Чаще всего низкое значение ОБМ у женщин репродуктивного возраста является следствием применения антибактериальных препаратов. В этом случае исследование рекомендуется повторить не ранее чем через 1-2 недели после окончания курса терапии.

II этап. Оценка нормофлоры влагалища.

Относительное количество Lactobacillus spp., выше -0,1 lg (> 80%): нормоценоз.

Относительное количество Lactobacillus spp., от -0,7 до -0,1 lg (20-80%): умеренный дисбиоз.

Относительное количество Lactobacillus spp., ниже -0,7 (< 20%): выраженный дисбиоз.

III этап. Оценка количественного соотношения условно-патогенных факультативно-анаэробных и облигатно-анаэробных микроорганизмов.

Проводиться при умеренном или выраженном дисбиозе влагалища.

Относительное количество микрорганизма менее -2,0 lg (<1,0%): незначительно повышенный уровень.

Относительное количество микроорганизма от -2,0 до -1,0 lg (1-10%): умеренно повышенный уровень.

Относительное количество микрорганизма более -1,0 (> 10%): значительно повышенный уровень.

IV этап. Оценка наличия Mycoplasma hominis и грибов рода Candida.

Количественную оценку Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Candida spp. проводят только по абсолютным показателям. Пороговым диагностическим уровнем для Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis является значение абсолютного показателя 105 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец) – 5,0]. Для грибов рода Candida абсолютное значение 104 ГЭ/образец [Lg (ГЭ/образец) – 4,0].

Mycoplasma genitalium в данной тест-системе определяется качественным методом. Mycoplasma genitalium является абсолютным патогеном и её выявления свидетельствует об урогенитальном микоплазмозе.

По результатам исследования выдаётся заключение.

Дополнительно рекомендуемые исследования: G255 Фемофлор 8; G266 Диагностика бактериального вагиноза; G275 Панель Фемофлор Скрин; G300 Флороценоз/ Микоплазмы (количественное определение).

Фемофлор 16 - исследование биоценоза влагалища у женщин методом PCR Real time (ПЦР в режиме реального времени), метод позволяет количественно определить состав микрофлоры влагалища: факультативно-анаэробные микроорганизмы: Lactobacillus spp., Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp.; облигатно-анаэробные микроорганизмы: Gardnerella vaginalis/ Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacterium spp., Megasphaera spp./Veilonella spp./Dialister spp., Lachnobacterium spp./Clostridium spp., Mobiluncus spp./Corynebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobium vaginae; микоплазмы: Mycoplasma hominis/Mycoplasma genitalium, Ureaplasma spp.; грибы: Candida spp. Кроме того, по данным исследования проводиться оценка исследуемого биоценоза в целом и определение этиологии инфекционного процесса. Формат исследования — количественный.

По данным многочисленных исследований как отечественных, так и зарубежных авторов, влагалище женщины колонизировано микрофлорой, состав которой варьирует в зависимости от множества экзогенных и эндогенных факторов. Во влагалищной микрофлоре женщин помимо Lactobacillus spp. (относятся к нормофлоре, доля их в норме составляет более 80%), могут обнаруживаться факультативно-анаэробные микроорганизмы: Enterobacterium spp. (являются компонентами нормальной флоры, могут быть этиологической причиной вагинита), Streptococcus spp. (могут быть причиной бактериального вагиноза), Staphylococcus spp. (являются компонентами нормальной флоры, могут быть этиологической причиной вагинита); облигатно-анаэробные микроорганизмы: Gardnerella vaginalis (представитель транзиторной микрофлоры, один из этиологических агентов бактериального вагиноза), Prevotella bivia (встречаются в урогенитальном и кишечном тракте, могут быть причиной развития бактериального вагиноза), Porphyromonas spp. (входят в состав нормальной микрофлоры урогенитального тракта и полости рта, могут быть причиной бактериального вагиноза), Eubacterium spp. (один из основных обитателей кишечника, условно-патогенные микроорганизмы, могут быть причиной развития бактериального вагиноза), Sneathia spp. (участвует в формировании бактериального вагиноза), Leptotrichia spp. (ассоциирована с развитием бактериального вагиноза), Fusobacterium spp. (условно-патогенные микроорганизмы, могут участвовать в развитии бактериального вагиноза), Megasphaera spp. (ассоциированы с развитием бактериального вагиноза), Veilonella spp. (условно-патогенные микроорганизмы, могут участвовать в развитии бактериального вагиноза), Dialister spp. (условно-патогенные микроорганизмы, могут участвовать в развитии бактериального вагиноза), Lachnobacterium spp. (ассоциированы с развитием бактериального вагиноза), Clostridium spp. (нормальные обитатели кишечника, условно-патогенные микроорганизмы, могут участвовать в развитии бактериального вагиноза), Mobiluncus spp. (условно-патогенные микроорганизмы, принимают участие в развитии бактериального вагиноза), Corynebacterium spp. (условно-патогенные микроорганизмы, могут вызывать инфекции урогенитального тракта), Peptostreptococcus spp. (условно-патогенные микроорганизмы, могут принимать участие в развитии бактериального вагиноза), Atopobium vaginae (имеет этиологическое значение в развитии бактериального вагиноза); микоплазмы: Mycoplasma hominis (условный патоген), Ureaplasma spp. (условный патоген); грибы: Candida spp. (условно-патогенные грибы).

Дисбиоз влагалища у женщин представляет собой нарушение количественно-качественных взаимоотношений резидентных микроорганизмов: сапрофитных и условно-патогенных, населяющих влагалище в норме. Развитие дисбиоза влагалища может сопровождаться метаболическими, иммунными нарушениями и в ряде случаев клиническими проявлениями, степень выраженности которых может варьировать от бессимптомного носительства до выраженной клинической манифестации. В свете подобного рассмотрения понятия дисбиоза влагалища такие заболевания, как бактериальный вагиноз, урогенитальный кандидоз, заболевания, ассоциированные с микоплазмой, могут являться частными проявлениями дисбиоза в целом.

В настоящее время для установления диагноза заболевания урогенитального тракта используют традиционные методы клинической лабораторной диагностики: микроскопию нативных и окрашенных метиленовым синим и по Граму препаратов отделяемого мочеполовых органов, культуральное микробиологическое исследование отделяемого мочеполовых органов и ПЦР-исследование (определение ДНК возбудителя в клиническом материале). Микроскопия мазков отделяемого мочеполовых органов, окрашенных по Граму, позволяет выявить следующее: количество и вид эпителиоцитов, количество лейкоцитов и эритроцитов, наличие фагоцитоза, состав и относительную количественную характеристику микрофлоры. При этом многие виды этиологически значимых и условно-патогенных возбудителей невозможно выявить при световой микроскопии, например, такие как Atopobium vaginae, Mycoplasma hominis и т.д.

Микробиологическое исследование является «золотым стандартом» лабораторной диагностики, поскольку позволяет идентифицировать микроорганизм до вида и определить чувствительность выделенного штамма к лекарственным препаратам. Однако и этот метод не лишен ряда недостатков, так как условно-патогенная микрофлора, главным образом, представлена облигатно-анаэробными и факультативно-анаэробными микроорганизмами, для культивирования которых требуются высококачественные селективные питательные среды, специализированные лаборатории, оснащенные необходимым лабораторным оборудованием для выращивания анаэробов, специальная подготовка медицинского персонала лаборатории. Метод ПЦР с детекцией результата по окончании реакции (по конечной точке) без количественного определения инфекционного возбудителя позволяет быстро и эффективно выявить искомый патогенный или условно-патогенный микроорганизм, минуя стадию культивирования и выделения чистой культуры. Однако выявление условно-патогенных микроорганизмов без учета количества конкретного микроорганизма и количественно-качественного состава микрофлоры, не позволяет определить этиологическое значение выявленных условно-патогенных микроорганизмов в развитии инфекционно-воспалительного процесса у конкретного пациента.

Решением проблемы количественной оценки широкого спектра условно-патогенных микроорганизмов, в том числе труднокультивируемых и некультивируемых микробиологическими методами, является использование тест-системы Фемофлор-16, основанной на методе PCR Real time, производства ООО «ДНК-Технология», Россия. В основу способа положена комплексная количественная оценка микрофлоры влагалища с проведением сравнительного анализа конкретных представителей нормофлоры и условно-патогенной микрофлоры с общим количеством микроорганизмов с целью выявления дисбаланса, степени его выраженности и определения этиологической роли конкретных условно-патогенных микроорганизмов в его развитии.

Оценка биоценоза влагалища.

Определение этиологии инфекционного процесса при бактериальном вагинозе.

Контроль эффективности лечения бактериального вагиноза.

Обследование беременных.

Бесплодие.

За 10 дней до исследования необходимо отменить антибактериальные препараты и мес-тные антисептические средства. Материал на исследование необходимо забирать до проведения кольпоскопии и УЗИ-исследования с влагалищным датчиком. Недопустимо забирать материал во время месячных.

Соскоб из влагалища. Погрузить рабочую часть зонда в вагинальное отделяемое заднего свода влагалища и, вращая зонд, максимально набрать материал. Извлечь зонд и поместить его рабочую часть в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, зонд удалить, пробирку закрыть, защёлкнув замок.

На этикетке пробирки указать Ф.И.О. пациента (или номер) и вид исследования. В направлении на исследование обязательно указать Ф.И.О. пациента, пол, дату рождения, номер пробирки (контейнера), вид материала и необходимые исследования. Материал должен быть доставлен в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру, материал может храниться в холодильнике при температуре + 2 - +8ºС.

Материал для исследования: соскоб из влагалища.

Метод исследования: ПЦР Real time

Единицы измерения: абсолютные и относительные количественные показатели микрофлоры

Количественная оценка влагалищной микрофлоры проводится как в абсолютных, так и относительных показателях. Абсолютный показатель: количество ДНК искомого микроорганизма в образце принято выражать в геном-эквивалентах (ГЭ), которое пропорционально количеству микроорганизма. ГЭ соответствует количеству копий ДНК искомого микроорганизма в образце, количество ДНК искомого микроорганизма может быть представлено и в виде десятичного логарифма - Lg (ГЭ/образец). Например, количество Lactobacillus spp. в образце = 107 ГЭ/образец, или в виде Lg (ГЭ/образец) = 7,0. Абсолютный показатель, зависит от техники взятия биоматериала и способа выделения ДНК. Разная техника взятия образца может приводить к тому, что в пробирку будет попадать разное количество биоматериала, что влияет на количественные показатели.

Относительный количественный показатель микрооганизма рассчитывается как отношение количества искомого микроорганизма к количеству общей бактериальной массы (ОБМ). Относительные показатели являются более точными и объективными, так как на них в значительно меньшей степени влияют погрешности, допускаемые как врачами-клиницистами при получении биоматериала, так и врачами клинической лабораторной диагностики при выполнении анализа. Относительное количество микрооганизма может быть представлено в двух форматах: разница десятичных логарифмов количества соответствующей группы микроорганизмов и ОБМ и в процентах по отношению к ОБМ.

В клиниках партнеров BION или в процедурном кабинете